ADP-Glo Kinase Assay

ADP-Glo Kinase Assay měří množství ADP, které vzniká při kinázové reakci. Esej je vhodná pro měření účinku chemických látek na aktivitu purifikovaných enzymů a je ideální jak pro primární screening tak pro profilování selektivity. Samotné stanovení probíhá ve dvou krocích. Sledovaný enzym je nejprve inkubován se známým množstvím ATP a substrátem. Přidáním prvního reagentu je reakce zastavena a zbývající ATP vyčerpáno. Následně se přidá druhý reagent, který konvertuje vzniklé ADP zpět na ATP a navíc obsahuje firefly luciferázu s luciferinem. Ta spotřebovává ATP a generuje signál úměrný aktivitě sledované kinázy.

ADP-Glo má široký dynamický rozsah a generuje silný signál i při nízké konverzi ATP na ADP. Je tedy vhodné i pro studium enzymů s nízkou aktivitou jako je např. tyrosinkinázový receptor aj. Esej lze použít pro koncentrace až 1mM ATP, což je důležité pro kinázy s vysokou hodnotou K_m pro ATP. Běžně lze dosáhnout Z faktoru > 0,7 a stabilní luminiscence umožňuje zpracování i velkého množství vzorků bez nutnosti přesně časované inkubace.