Proteasome-Glo Trypsin-Like Cell-Based Assay

26S proteazom je 2,5MDa multiproteinový komplex přítomný ve všech eukaryotických buňkách, který se podílí na řízení obratu nepotřebných proteinů. Proteasome-Glo Trypsin-Like Cell-Based Assay je homogenní luminiscenční esej pro měření trypsinové aktivity proteazomu v buněčných kulturách a lze také využít pro screening inhibitorů proteazomu a sledování proteazomem regulované degradace proteinů. Esej využívá luminiscenčního prosubstrátu Z-LRR-aminoluciferinu, který je po štěpení proteazomovou podjednotkou oxidován luciferázou a generuje se luminiscenční signál úměrný aktivitě podjednotky. Prosubstrát je rozpuštěn v optimalizovaném pufru, který zajišťuje dostatečnou permeabilizaci buněk a zároveň zachovává maximální aktivitu proteazomových podjednotek a luciferázy. Jednoduchý protokol vyžaduje pouze přidání reagentu k nakultivovaným buňkám a po krátké 10min inkubaci lze přímo měřit intenzitu signálu. Esej lze použít i pro high-throughput screening v 96 a 384-jamkových destičkách.