Evropský lékopis opouští testování na králících: přechod k PyroCell® MAT
Testování pyrogenů prochází zásadní proměnou. Králičí pyrogenní test postupně ustupuje metodám bez použití zvířat, které lépe odpovídají současným etickým i regulatorním požadavkům. Test aktivace monocytů podle Evropského lékopisu umožňuje zachytit endotoxinové i neendotoxinové pyrogeny a systém PyroCell® MAT nabízí praktické řešení založené na lidských buňkách a detekci IL-6.
Obsah článku
- Testování pyrogenů
- Rozdíl mezi RPT a BET testem
- Jak se RPT používal
- Proč RPT postupně končí - Test aktivace monocytů MAT
- Systém PyroCell® MAT od firmy Lonza - Často kladené dotazy
Testování pyrogenů
Bezpečnost léčiv a dalších farmaceutických přípravků závisí mimo jiné na tom, zda neobsahují pyrogeny — látky, které mohou po podání do organismu vyvolat horečku, zánětlivou reakci nebo jiné nežádoucí účinky. Právě proto se ve farmacii po desetiletí používal Rabbit Pyrogen Test (RPT), tedy králičí pyrogenní test.
Rozdíl mezi RPT a BET testem
Králičí pyrogenní test byl dlouhou dobu považován za standardní metodu, protože dokázal zachytit přítomnost pyrogenních látek na úrovni reakce celého živého organismu.
S rozvojem vědy se ale začaly objevovat přesnější, rychlejší a etičtější metody. Jednou z nich je BET neboli Bacterial Endotoxins Test. Ten se dnes používá velmi často, protože dokáže účinně detekovat bakteriální endotoxiny — tedy jednu z nejvýznamnějších skupin pyrogenů. Hlavní rozdíl mezi RPT a BET je ale v rozsahu detekce. Zatímco RPT sleduje celkovou horečnatou reakci organismu na různé pyrogenní látky, BET je zaměřený konkrétně na endotoxiny pocházející z gramnegativních bakterií.
Právě v tom spočívá jeho výhoda i omezení. BET je rychlejší, laboratorní a nevyžaduje použití králíků, ale nedokáže zachytit všechny typy pyrogenů. RPT měl širší biologický záběr, protože pracoval s reakcí živého organismu, avšak byl spojen s etickými otázkami, vyšší zátěží pro zvířata a postupně i s tlakem regulačních autorit na jeho nahrazení.
Jak se RPT používal
RPT se po desetiletí používal ke kontrole bezpečnosti léčiv a dalších farmaceutických přípravků určených zejména k injekčnímu nebo jinému přímému podání do organismu.
Test se prováděl tak, že se zkoušený přípravek podal králíkům a následně se sledovalo, zda u nich dojde ke zvýšení tělesné teploty. Zvýšená teplota mohla signalizovat přítomnost pyrogenní kontaminace.
Význam RPT spočíval především v tom, že umožňoval sledovat reakci celého živého organismu na testovaný přípravek. Díky tomu se dlouhou dobu používal jako jedna z hlavních metod pro ověřování pyrogenní bezpečnosti farmaceutických produktů.
Významným posunem byl až vznik Testu aktivace monocytů (Monocyte Activation Test - MAT) v 90. letech 20. století, který nabízí moderní in vitro alternativu k RPT a umožňuje detekci pyrogenů bez použití pokusných zvířat.
Proč RPT postupně končí
RPT postupně končí. Hlavními důvody jsou etické otázky spojené s používáním pokusných zvířat, vědecký pokrok a dostupnost moderních metod. Dnes proto farmaceutický průmysl stále více přechází k moderním in vitro metodám, jako je MAT. Ten dokáže detekovat nejen endotoxiny, ale i další neendotoxinové pyrogeny, a přitom nevyžaduje testování na živých zvířatech. Právě proto se RPT postupně stává minulostí a otevírá prostor metodám, které lépe odpovídají současným vědeckým, etickým i regulatorním požadavkům.
V současnosti je testování na zvířatech stále více kritizováno. Evropské autority se k pokračujícímu používání RPT staví kriticky již řadu let, zejména proto, že existuje alternativní in vitro test, který je uznáván jako lékopisná metoda podle Evropského lékopisu.
Proto evropské regulatorní autority podporují přechod od RPT k alternativním metodám, jako je MAT. Tento krok je součástí principu 3R — replace, reduce, refine — tedy nahrazovat, omezovat a zdokonalovat používání zvířat při testování.
Více informací naleznete v tomto čánku: Ph. Eur. announces end for rabbit pyrogen test
Test aktivace monocytů MAT
Test aktivace monocytů (MAT) je in vitro testovací systém používaný k detekci pyrogenů ve farmaceutických přípravcích. Slouží jako náhrada králičího pyrogenního testu (RPT), který vyžaduje použití pokusných zvířat. Ve srovnání s Testem bakteriálních endotoxinů (BET) dokáže MAT citlivě detekovat také neendotoxinové pyrogeny.
Zde na obrázku si můžete porovnat testy MAT, RPT a BET pro detekci endotoxinových a neendotoxinových pyrogenů ve farmaceutických přípravcích.
Systém PyroCell® MAT od firmy Lonza
Lonza vyvinula systém PyroCell® MAT , který se skládá z kryokonzervovaných směsných lidských mononukleárních buněk periferní krve (PBMC), optimalizovaného suplementu buď na bázi fetálního bovinního séra (FBS), nebo lidského séra (HS) , a lidského IL-6 ELISA testu.
Rapid ELISA Kit se skládá ze dvou sad, konkrétně z PeliKine IL-6 ELISA Rapid Set A, která obsahuje vazebné protilátky, referenční standard IL-6 a ředicí pufr HPE, a z Pelikine IL-6 ELISA Rapid Set B, dříve známé jako Pelikine Toolset, která nyní zahrnuje předem potažené destičky, pufry, substrát a stop roztok.
Nový test PeliKine human IL-6 Rapid ELISA je validován se soupravami PyroCell® MAT Kit a PyroCell® MAT HS Kit pro srovnatelnou výkonnost.
Přechod od RPT k moderním metodám, jako je MAT, představuje důležitý krok směrem k citlivější, spolehlivější a etičtější detekci pyrogenů. systém PyroCell® MAT od Lonza nabízí řešení, které podporuje principy 3R a zároveň odpovídá současným požadavkům farmaceutického testování.
Často kladené dotazy
- Co jsou pyrogeny?
Pyrogeny jsou látky, které mohou po podání do organismu vyvolat horečku, zánětlivou reakci nebo jiné nežádoucí účinky. Ve farmaceutickém průmyslu je proto důležité ověřovat, zda léčiva, zdravotnické prostředky nebo suroviny nejsou pyrogeny kontaminované.
- Co je Rabbit Pyrogen Test neboli RPT?
Rabbit Pyrogen Test, zkráceně RPT, je králičí pyrogenní test. Dlouhodobě se používal ke kontrole pyrogenní kontaminace farmaceutických přípravků. Test byl založený na sledování tělesné teploty králíků po podání testovaného vzorku.
- Proč se RPT používal?
RPT se používal proto, že umožňoval sledovat reakci celého živého organismu na testovaný přípravek. Díky tomu byl po mnoho let považován za důležitou metodu pro ověřování pyrogenní bezpečnosti léčiv a přípravků určených k přímému podání do organismu.
- Proč RPT postupně končí?
RPT postupně ustupuje kvůli etickým otázkám spojeným s používáním pokusných zvířat, vědeckému pokroku a dostupnosti moderních in vitro metod. Jednou z hlavních alternativ je MAT test, který umožňuje detekci pyrogenů bez použití živých králíků.
- Co je BET test?
BET neboli Bacterial Endotoxins Test je test používaný k detekci bakteriálních endotoxinů. Endotoxiny patří mezi významné pyrogeny, ale nejsou jediným typem pyrogenních látek.
- Jaký je rozdíl mezi RPT a BET testem?
RPT sleduje celkovou horečnatou reakci živého organismu na různé pyrogenní látky. BET test je naproti tomu zaměřený především na detekci bakteriálních endotoxinů. Je rychlejší a nevyžaduje použití králíků, ale nedokáže zachytit všechny typy pyrogenů.
- Co je MAT test?
MAT neboli Monocyte Activation Test je in vitro testovací systém používaný k detekci pyrogenů ve farmaceutických přípravcích. Slouží jako moderní alternativa ke králičímu pyrogennímu testu.
- Proč je MAT považován za náhradu RPT?
MAT umožňuje testování pyrogenů bez použití živých králíků a zároveň dokáže zachytit širší spektrum pyrogenních látek než samotný BET test. Proto je vhodnou alternativou k tradičnímu RPT. Je etickou a udržitelnou alternativou pro RPT a je uznáván jako lékopisná metoda podle Evropského lékopisu. Je to přímá náhrada RPT testu.
- Co je PyroCell® MAT System?
PyroCell® MAT System je systém od společnosti Lonza určený pro testování pyrogenů metodou MAT. Skládá se z kryokonzervovaných směsných lidských mononukleárních buněk periferní krve, optimalizovaného suplementu a lidského IL-6 ELISA testu.
- Jak systém PyroCell® MAT souvisí s principem 3R?
Princip 3R znamená replace, reduce, refine — tedy nahrazení, omezení a zdokonalení používání zvířat při testování. PyroCell® MAT tento přístup podporuje, protože nahrazuje testování na králících moderní in vitro metodou založenou na lidských buňkách.
|
|
Autorka článku: |
