Proteasome-Glo 3-Substrate Cell-Based Assay System

26S proteazom je 2,5MDa multiproteinový komplex přítomný ve všech eukaryotických buňkách, který se podílí na řízení obratu nepotřebných proteinů. Proteasome-Glo 3-Substrate Cell-Based Assay System obsahuje tři homogenní luminiscenční eseje pro měření chymotrypsinové, trypsinové a kaspázové aktivity podjednotek proteazomu v buněčných kulturách a lze využít i pro screening inhibitorů proteazomu a sledování proteazomem regulované degradace proteinů. Eseje využívají luminiscenční prosubstráty, které jsou specificky štěpeny jednotlivými proteazomovými podjednotkami a následně oxidovány luciferázou. Následně se generuje luminiscenční signál úměrný aktivitě enzymu. Prosubstráty pro jednotlivé podjednotky jsou Suc-LLVY-aminoluciferin pro sledování chymotrypsinové aktivity, Z-LRR-aminoluciferin pro trypsinovou aktivitu a Z-nLPnLD-aminoluciferin pro kaspázovou aktivitu. Prosubstráty jsou rozpuštěny v optimalizovaném pufru, který zajišťuje permeabilizaci buněk a zároveň zachovává maximální aktivitu proteazomových podjednotek a luciferázy. Jednoduchý protokol vyžaduje pouze přidání reagentu k nakultivovaným buňkám a po krátké inkubaci lze přímo měřit intenzitu signálu. Esej lze použít i pro high-throughput screening v 96 a 384-jamkových destičkách.