Luciferázové eseje a vektory

Luciferázové reportérové eseje umožňují studium exprese cílových genů. Při experimentech se vsune sekvence pro reportérový gen (firefly, NanoLuc nebo Renilla luciferáza) do promotorové oblasti sledovaného genu. Takto připravený vektor se transfekuje do buněk a ty se treatují vybranou chemickou látky nebo specifickými podmínkami (hypoxie, zvýšená teplota apod.). V případě, že dojde k expresi sledovaného genu, je spolu s ním koexprimován i gen pro luciferázu a po přidání luciferázového substrátu můžeme měřit nárůst luminiscenčního signálu pomocí luminometru nebo multimodálního destičkového readeru. V naší nabídce najdete řadu již hotových vektorů pro sledování vybraných signálních drah (GPCR signalizace, stresová odpověď, cytokinová signalizace aj.) nebo prázdné vektory s různými variantami jednotlivých luciferáz a promotorů, do kterých si můžete jednoduše naklonovat vlastní sekvence.

Pro transfekci vektorů do buněk můžete využít některé z našich transfekčních činidel Fugene nebo ViaFect, které naleznete v kategorii transfekční činidla.

Samotná kvantifikace pak vyžaduje ještě přidání luciferázové eseje k buňkám na konci treatmentu. Tyto eseje obsahují lyzační pufr a substrát pro vybranou luciferázu, tzv. luciferin, po jehož přidání dochází k tvorbě bioluminiscenčního záření. Dostupné jsou eseje pro všechny tři nejpoužívanější luciferázy (firefly, NanoLuc a Renilla) jak v jednoreportérovém, tak i v duálním uspořádáním. Můžete si také vybrat eseje s různou délkou dosvitu. Zábleskové "flash" eseje poskytují intenzivní signál s velmi krátkou dobou svitu v řádu jednotek minut, zatímco "glo" eseje poskytují o něco méně intenzivní signál s délkou dosvitu v řádu desítek minut až několika hodin.

Stáhnout brožuru - Bioluminescent Reporter Assays