Sondy pro LightCycler™

Hybridizační systém sond je založen na principu dvou oligonukleotidových sond hybridizujících na DNA v opačné orientaci a v blízkosti cílové DNA sekvence. První sonda je označena na 3´konci fluoresceinem a plní funkci donorové barvičky; druhá sonda je označena na 5´konci, např. LightCycler Red 640 a slouží jako akceptorová barvička. Obě sondy jsou navrženy tak, aby v reasociační fázi přisedaly k cílové sekvenci v těsné blízkosti s maximálním oddálením 1-5 nukleotidů a mohly tak plnit funkci donora a akceptora. Kapilára s probíhající PCR je v měřícím kanálu osvícena UV zářením o vlnové délce 470 nm, čímž dojde k excitaci donorové barvičky, která emituje zelené fluorescenční světlo, kterým je excitován akceptor. Výsledkem je emise červeného fluorescenčního světla, které je měřeno na konci reasociační fáze PCR. Po reasociační fázi dochází v dalším kroku k vzestupu teploty, což má za následek oddělení hybridizovaných sond od cílových sekvencí (denaturace) a při dalším cyklu se děj opakuje.
LC sondy jsou dodávané v množstvích od 1 do 30 nmol, lyofilizované, jsou HPLC purifikovány a kontrolovány pomocí MLDI-TOF. V nabídce jsou sondy o délce 15-40 nukleotidů (optimálně 20-30 nukleotidů).